本试剂盒仅供研究使用 检测范围：50 ng/ml -400 ng/ml zui低检测限：20 ng/ml 预期应用：本试剂盒可检测小麦、玉米和饲料中的DON。 有效期：6个月 说明 1. 试剂盒保存： 2-8℃避光保存。 2. 浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。 3. 中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。 4. 刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。 实验原理 本试剂盒采用间接竞争酶联免疫吸附ELSIA原理快速定量检测小麦、玉米和饲料中的DON。 试剂盒组成及试剂配制 1. 酶联板（Assay plate ）： 一块（96孔）。 2. 标准品（Standard）： 4×1ml/瓶。 | 标准品 | S1 | S2 | S3 | S4 | | 浓度（ng/ml） | 50 | 100 | 200 | 400 | 3. DON抗体（DON Antibody）： 1×6ml/瓶。 4. 酶标二抗（Conjugate）： 1×12ml/瓶。 5. 显色液（Substrate）： 1×12ml/瓶。 6. 浓洗涤液（Wash Buffer）： 1×25ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释20倍。 7. 终止液（Stop Solution）： 1×6ml/瓶（2N H2SO4）。 需要而未提供的试剂和器材 1. 标准规格酶标仪 2. 高速离心机 3. 电热恒温培养箱 4. 干净的试管和Eppendof管 5. 系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，用多通道移液器 6. 蒸馏水，容量瓶等 标本处理 1. 脂肪含量低的固体样品（大米、玉米和小麦等） 称取5g粉碎样品于100ml带塞三角瓶中，加入25ml超纯水或蒸馏水。充分振荡3分钟，然后用定性滤纸过滤，收集滤液。取滤4ml，加入4ml 超纯水或蒸馏水，混匀，定性滤纸过滤，此为样品待检液。 2. 啤酒、麦乳汁 称5ml样品于100ml带塞三角瓶中，加入45ml超纯水或蒸馏水，混匀，定性滤纸过滤，此为样品待检液。 注意事项 1. 某些样品待检液（如花生等）久置影响检测结果的准确性，为保证检测的准确性，样品提取后请即时检测。 2. 若样品待检液不立即检测，请将其存储于棕色玻璃瓶内，2-8℃避光保存。 3. 试剂盒在使用前，请将试剂盒内所有试剂放到室温（20-25℃）进行温度平衡。试剂用完后立即将其放置回 2-8℃冰箱内保存。 4. 在每个步骤操作时，速度要快，不要使板孔暴露在空气中时间过久，避免酶标板变干。 操作步骤 1. 实验准备：从冰箱取出试剂盒，恢复至室温。浓缩洗涤液用超纯水或蒸馏水稀释20倍，待用。 2. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加洗涤液100μl（不加DON抗体）.余孔分别加标准品或待测样品50μl，然后再加入DON 抗体50μl。注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应30分钟。 为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。 3. 弃去孔内液体，甩干，用洗涤液洗板4次，每次浸泡1-2分钟，200μl/每孔，甩干。 4. 每孔加酶标二抗 100μl，37℃，30分钟。 5. 温育后，弃去孔内液体，甩干，洗板4次，每次浸泡1-2分钟，200μl/每孔，甩干。 6. 依序每孔加显色液100μl，37℃避光显色（10分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔显色不明显，即可终止）。 7. 依序每孔加终止溶液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。 8. 用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。在加终止液后15分钟以内进行检测。 实验备注 1. 用户在初次使用试剂盒时，应将各种试剂管离心数分钟，以便试剂集中到管底。 2. 每次实验留一孔作为空白调零孔，该孔不加任何试剂，只是zui后加显色液及2N H2SO4。测量时先用此孔调OD值至零。 3. 为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜。 4. 未使用完的酶标板或者试剂，请于2-8℃保存。 5. 建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。 洗板方法 手工洗板方法：吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将推荐的洗涤缓冲液至少0.3ml注入孔内，浸泡1-2分钟。根据需要，重复此过程数次。
自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。 计算 以标准物的浓度为横坐标（对数坐标），OD值为纵坐标（普通坐标），在半对数坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 注意事项 1. 洗涤过程非常重要，不充分的洗涤易造成假阳性。 2. 一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。 3. 请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。 4. 如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请zui后乘以稀释倍数。 5. 底物请避光保存。 6. 不要用其它生产厂家的试剂替换试剂盒中的试剂。 |
