本试剂盒仅供研究研究使用
预期应用
ELISA法定量测定人血清、血浆、或其它相关液体中U-TSH含量。 实验原理
本试剂盒应用竞争抑制酶标免疫分析法测定标本中U-TSH水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，固相抗体与一定量的生物素标记的T4和非标记抗原（标本或标准品）进行竞争抑制反应，待测定的标本量越多，抗体与生物素标记的U-TSH结合就越少，反之结合就多。zui后再加入HRP标记的亲和素，经过*洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的U-TSH呈负相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。 试剂盒组成
1． 酶联板：一块（96孔）
2． T4标准品：1ml/瓶×6瓶。其浓度依次为400 ng/mL，200 ng /mL ，100 ng /mL，50 ng /mL和 25ng /mL，0 ng/mL。
3． 检测溶液A：1×10 ml
4． 检测溶液B：1×10 ml
5． 底物溶液A：1×10 ml
6． 底物溶液B：1×10 ml
7． 浓洗涤液：1×30ml，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。
8． 终止液：1×20ml。 标本的采集及保存
1．血清：标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。
2．血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心15分钟，或将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。
注：标本溶血会影响zui后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。 操作步骤
各试剂在使用前平衡至室温。
1． 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。除空白孔外，余孔分别加标准溶液或待测样品50μl，以及检测溶液A 50μl，轻轻混匀，37℃，60分钟。
2． 洗板3-5次，350μl/每孔，甩干。
3． 每孔加检测溶液 B 50μl，37℃，30分钟，洗板3-5次，甩干。
4． 依序每孔加底物溶液A、B各50μl，37℃避光显色15分钟。
5． 依序每孔加终止溶液50μl，终止反应。用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。
注：
1． 每次实验留一孔作为空白调零孔，该孔不加任何试剂，只是zui后加底物溶液及2NH2SO4。测量时先用此孔调OD值至零。
2．为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内。 洗板方法
手工洗板方法：吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层
吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将推荐的洗涤缓冲液至少0.4ml注入孔内，浸泡1-2分钟，根据需要，重复此过程数次。
自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。 特异性
本试剂盒可同时检测重组或天然的人U-TSH，且与其它相关蛋白无交叉反应。 检测范围：
0.15 ng /mL -1000 ng /mL 计算
以标准物的浓度为横坐标（对数坐标），OD值为纵坐标（普通坐标），在半对数坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 注意事项
1． 洗涤过程非常重要，不充分的洗涤易造成假阳性。
2． 一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
3． 请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。
4． 如标本中T4含量过高，请先稀释后再测定，计算时请zui后乘以稀释倍数。
5． 底物请避光保存。
6．温育反应过程中请帖粘胶板 说明
1.在储存及孵育过程中避免将试剂暴露在强光中。所有试剂瓶盖须盖紧以防止蒸发和污染，试剂避免受到微生物的污染，因为蛋白水解酶的干扰将导致出现错误的结果。
2. 小心吸取试剂并严格遵守给定的孵育时间和温度。请注意在吸取标本 / 标准品，酶结合物或底物时，*个孔与zui后一个孔加样之间的时间间隔如果太大，将会导致不同的 “预孵育”时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。而且，洗涤不充分将影响试验结果。
3. 试剂盒保存：部分试剂保存于-20℃，部分试剂保存于2-8℃，具体以标签上的标示为准。
4. 浓洗涤液会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。
5. 刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。
6. 中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。
7. 所有的样品都应管理好，按照规定的程序处理样品和检测装置。 |
