本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断。 微囊藻毒素LR（MC-LR）定量检测试剂盒（ELISA） 使用说明书 【试剂盒名称】 微囊藻毒素LR（MC-LR）定量检测试剂盒（ELISA） 【试剂盒用途】 定量检测组织及相关液体样本中微囊藻毒素LR（MC-LR）的含量。 【检测原理】 本试剂盒采用双抗体一步夹心酶联免疫吸附法（ELISA）。将标准品、待测样本加入到预先包被微囊藻毒素LR（MC-LR）单克隆抗体透明酶标包被板中，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分，再加入酶标工作液，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分。依次加入底物A、B，底物（TMB）在辣根过氧化物酶（HRP）催化下转化为蓝色产物，在酸的作用下变成黄色，颜色的深浅与样品中微囊藻毒素LR（MC-LR）浓度呈正相关，450nm波长下测定OD值，根据标准品和样品的OD值，计算样本中微囊藻毒素LR（MC-LR）含量。 【试剂盒组成】 | 1 | 酶标包被板 | 12孔×8条 | 7 | 显色剂B液 | 6mL | | 2 | 标准品 | 0.3mL×6管 | 8 | 终止液 | 6mL | | 3 | 20倍浓缩洗涤液 | 25mL | 9 | 说明书 | 1份 | | 4 | 样本稀释液 | 6mL | 10 | 封板膜 | 2张 | | 5 | 酶标试剂 | 10mL | 11 | 密封袋 | 1个 | | 6 | 显色剂A液 | 6mL | | | | 备注：标准品（S5→S0）浓度依次为：800、400、200、100、50、0 ng/L. 【需要而未提供的试剂和器材】 1、37℃恒温箱 2、标准规格酶标仪 3、精密移液器及一次性吸头 4、蒸馏水 5、一次性试管 6、吸水纸 【操作步骤】 1、准备：从冰箱取出试剂盒，室温复温平衡30分钟。 2、配液：用蒸馏水将20倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。 3、加标准品和待测样本：取足够数量的酶标包被板，固定于框架上，分别设置标准品孔、待测样本孔和空白对照孔，记录各孔位置，在标准品孔中加入标准品50μL；待测样本孔中先加入待测样本10μL，再加样本稀释液40μL（即样本稀释5倍）；空白对照孔不加。 4、加酶标工作液：每孔加入酶标工作液100μL，空白对照孔不加。 5、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育60min。 6、洗板：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机按说明书操作洗板）。 7、显色：每孔先加入显色剂A 液50μL，再加入显色剂B液 50μL，平板混匀器混匀30s（或用手轻轻震荡混匀30s），37℃避光显色15min。 8、终止：取出酶标板，每孔加终止液50μL，终止反应（颜色由蓝色立转黄色）。 9、测定：以空白孔调零，在终止后15分钟内，用450nm波长测量各孔的吸光值（OD值）。 10、计算：根据标准品的浓度及对应的OD值，计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样本的OD值，在回归方程上计算出对应的样品浓度，也可以使用各种应用软件来计算。zui终浓度为实际测定浓度乘以稀释倍数。 【样本要求】 1、样本不能含叠氮钠（NaN3），因为叠氮钠（NaN3）是辣根过氧化物酶（HRP）的抑制剂。 2、标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能立即试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。 3、样本应充分离心，不得有溶血及颗粒。 【注意事项】 1、实验严格按照说明书的操作进行，实验结果判定必须以酶标仪读数为准。 2、酶标包被板开封后如未用完，应立即装入密封袋中加干燥剂保存。 3、建议所有的标准品、样本和空白对照都做双份检测，取平均值，以减小实验误差。 4、牢记样本已经稀释5倍，计算结果乘以5才是样本实际浓度。 5、若显色过浅，可适当延长底物温育时间。 6、为避免交叉污染，标准品、样本和空白对照每加一个就要更换一次吸头；酶标工作液、样本稀释液和底物等公共组分，要悬臂加样，不得碰到微孔；不得重复使用封板膜。 7、试剂盒保质期内使用，不同批号的试剂不得混用。 8、底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。 【操作程序总结】 准备试剂，样品和标准品
加入准备好的样品和标准品 加入酶标试剂，37℃反应60分钟 洗板5次，加入显色液A、B，37℃显色15分钟 加入终止液 15分钟之内读OD值 计算 【检测范围】 0ng/L - 800ng/L 【规格】 96T/盒 【贮藏】 2-8℃，避光防潮保存。 【有效期】 6个月 |
