【产品简介】 新城疫（Newcastle disease,ND）又名为鸡瘟，是目前危害我过养殖业的主要禽流感业的主要禽流感传染病之一，主要侵害鸡，火鸡，其他禽类和野鸡类，引起呼气道感染及免疫抑制，多年来一直在各类禽类群中广泛存在，虽然有疫苗进行免疫接种，但免疫鸡群仍然发病，给养禽业造成了巨大损失。 【使用意义】 ①本产品用于鸡血清抗体的检测，以确定被检鸡是否感染过鸡新城疫病毒或免疫鸡体内抗体水平。 ②评估鸡群感染ND的风险程度。 ③了解雏鸡母源抗体水平，为ND免疫程序的制定提供参考。 【检测原理】 本品系由包被新城疫病毒的微孔板和酶标记抗鸡IgG及其他试剂组成，应用酶免间接法原理（ELISA）检测鸡血清或血浆中新城疫病毒IgG抗体。 【试剂盒组成】 | 1. | 鸡传染性支气管炎病毒抗原包被微孔板条 | 96T×1 | | 2. | 酶标记物 | 11ml×1 | | 3. | 样品稀释液 | 20ml×1 | | 4. | 显色剂A | 7 ml×1 | | 5. | 显色剂B | 7 ml×1 | | 6. | 洗涤液（用前1：25稀释） | 10 ml×2 | | 7. | 抗体阳性对照血清 | 0.6 ml×1 | | 8. | 抗体阴性对照血清 | 0.6 ml×1 | | 9. | 终止液 | 7 ml×1 | | 10. | 封板膜 | 3 | | 11. | 密封袋 | 1个 | | 12. | 说明书 | 1份 | 【使用方法】 1. 使用前将试剂盒置室温30分钟，恢复至室温。 2. 取所需用量包被微孔板条，设空白、阴性及阳性对照各2孔，未用的板条尽快密封，2～8℃保存。 3. 阴性、阳性对照孔分别加阴性、阳性对照血清100μl；空白对照孔不加；样品稀释，血清每孔样本先1：50稀释后加100μl；蛋黄以1:100稀释后每孔加100ul。 4. 混匀，置37℃温浴30分钟。 5. 扣去孔内液体，每孔加满洗涤液，静置60秒后弃去，重复洗涤5次，拍干。 6. 每孔加酶标记物100μl（空白孔除外）。 7. 置37℃温浴30分钟。 8. 洗涤，同步骤5。 9. 每孔依次加显色剂A、显色剂B各50μl，混匀，37℃避光反应10分钟。 10. 每孔加终止液50μl，混匀，置酶标仪450nm处测各孔A值（建议用双波长450nm、630nm）。 【结果判定】 1. 阴性对照：正常情况下，阴性对照孔A值≤0.1； 2. 阳性对照：正常情况下，阳性对照孔A值≥0.4； 3. 结果判定： 3.1 未曾免疫 临界值（C.O.）的计算：临界值=0.15+阴性对照孔均值；检测标本A450值≥临界值判定为本试验阳性；检测标本A450值＜临界值判定为阴性。所有阴性、阳性对照和样品的A值均须减去空白平均值后作为计算值；阴性对照孔A值大于0.10时应舍弃，如所有阴性对照孔A值都大于0.10时须重复实验；阴性对照孔低于0.05时以0.05计算。 3.2 免疫鸡群 检测样本A450值≥0.45即血凝滴度≥6log2时有很好的保护； 0.45> A450≥0.2时相应血凝滴度为5log2； 0.3> A450≥0.2时相应血凝滴度为4log2，有一定保护力； 当A450≤0.3时，建议加强免疫。 【注意事项】 1. 操作时必须戴手套，穿工作衣，严格健全和执行消毒隔离制度。 2. 试验结果的判定必须以酶标仪读数为准。 3. 样品稀释液应用加液器加注，并经常校对其准确性。 4. 洗涤时各孔均需加满液体，防止孔口有游离酶不能洗净。 5. 所有样品洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。 6. 微孔板从冷藏环境中取出时应在室温中平衡至潮气干尽后方可，未用完的微孔板须放入有干燥剂的密封袋中保存。 7. 用于检测的样品应保持新鲜。 8. 剩余样品及废弃物应经121℃高压蒸汽灭菌30分钟，或用5.0g/L次氯酸钠等消毒剂处理30分钟后废弃。 9. 不同批号试剂组分不得混用。 【保存与有效期】 于2～8℃避光保存，有效期自成品检定合格之日起为12个月。 |
