说明 本测试盒用间接竞争免疫分析法定量测定玉米中的伏马菌素B1（FB1）。该测试盒反应孔可拆卸，可测单份样品，也可测多份样品，定量分析时需有微孔板酶标仪。 一、概要 FB1是由串珠镰刀菌产生的真菌毒素，主要污染玉米及其制品。可诱发马的脑白质软化症和猪的肺水肿综合症。FB1对多种动物有肾脏毒性、肝脏毒性作用，对大鼠肝细胞和鸡巨噬细胞有细胞毒性。据报道，FB1与食管癌发病率有明显相关性，癌症研究中心把FB1划分到2B组，即人类可能的致癌物。因此FB1对人类健康和畜牧业发展构成潜在威胁，成为继黄曲霉毒素后的又一个研究热点。 目前检测粮食和饲料中FB1的仪器方法有液相色谱、气相色谱、质谱和毛细管电泳法等，这些方法灵敏度较高，结果稳定，但所需仪器设备昂贵，样品准备耗时长，不适于大量样品的筛选。本试剂盒是以应用单克隆抗体为基础的ELISA检测方法，可以准确快速检测玉米中的FB1。 二、技术指标 灵敏度： 试剂盒的灵敏度为10 ppb。 变异系数： 试剂盒条内变异＜10%，条间变异＜15%。 回收率： 回收率为70%~120%。 检测范围： 试剂盒zui低检出浓度为10ng/mL，校正曲线的线性范围10ng/mL~200ng/mL。 交叉反应： 交叉反应系数小于1%。 三、测定原理 本试剂盒用固相酶联免疫吸附原理，利用间接竞争ELISA法进行测定。用抗原包被微孔板，加入FB1标准品或样品、FB1单克隆抗体进行孵育后，将未与包被抗原结合的抗体洗去；再加入酶标记的抗鼠IgG抗体（酶标物）孵育，加入显色液显色，经终止液终止后，用酶标仪在450nm处测定OD值。 四、提供的物品 微孔板…………… 包被有FB1-BSA 5个浓度的FB1标准溶液（各0.5mL）： 标准1：0ng/mL ……………... 直接使用 标准2：10ng/mL …………直接使用 标准3：50ng/mL …………直接使用 标准4：100ng/mL……………直接使用 标准5：200ng/mL……………直接使用 抗F B1单克隆抗体溶液（6mL）..直接使用 酶标物（12mL） ……………….直接使用 显色液（12mL） ……………….直接使用 终止液（6mL） ……………….直接使用 浓缩洗液（30mL） ……………….稀释使用 五、盒中未提供，需自备物品 【仪器】微孔板酶标仪（可于450nm处测定）、振荡器、粉碎机、微量移液器 【耗材】量筒、漏斗、容量瓶、快速定性滤纸 【试剂】氯化钠（分析纯）、甲醇（分析纯）、纯水、去离子水或蒸馏水 六、操作者注意事项 ⒈标准溶液中含有FB1，应特别小心。 ⒉终止液含有硫酸，避免接触皮肤。 ⒊每次加样后立即将所有试剂放回2~8℃。 ⒋每步加样时间应控制在5min内。 ⒌孵育过程中应避光。 ⒍不要使用过期试剂盒。 ⒎不要交叉使用不同批号的试剂盒中的试剂。 七、储存条件 ⒈保存试剂盒于2~8℃。不要冷冻。 ⒉显色液对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。 ⒊将不用的微孔板放进原铝箔袋中，置2~8℃保存。 八、试剂变质的标志 标准1的吸光度值小于0.5个单位（A450nm<0.5）时，表示试剂可能变质。 九、样品处理程序 ⒈样品应当保存在阴凉避光之处及冷藏保存。 ⒉取5g粉碎的有代表性的样品，加1.25g氯化钠及25mL70%（体积比）甲醇-水溶液。 ⒊强力振荡3分钟。 ⒋用快速定性滤纸过滤。 ⒌取1mL滤液，加1%氯化钠溶液9mL进行稀释。 ⒍取50μL稀释液进行分析。 ⒎根据需要可以增减样品量，但甲醇-水溶液的量也应相应增减。 样本稀释倍数：50倍 十、酶免疫分析程序 ⒈浓缩洗液为10倍浓缩液，使用时与纯水、去离子水或蒸馏水按体积比1:9稀释后使用。 ⒉取所需数量的板条插入微孔架，用洗液洗涤微孔板3min×2次。 ⒊加入50mL标准品或处理好的样品到微孔，记录样品及标准的位置，每个标准和样品必须使用新的吸头。 ⒋加入50mL抗体溶液到每个微孔（注意移液器管尖不要接触到孔中的液体，避免交叉污染）中，37℃孵育90min。 ⒌甩掉孔中液体，用洗液洗涤微孔板3min×3次，zui后一次应在吸水纸上拍打以*除去孔中液体。 ⒍每孔加入酶标物100mL，37℃孵育60min。 ⒎用洗液洗涤微孔板3min×5次，zui后一次应在吸水纸上拍打以*除去孔中液体。 ⒏每孔加入显色液100mL，37℃孵育15min。 ⒐每孔加入终止液50mL，立即用酶标仪在波长450nm处测定吸光度值（OD值）。 十一、样品浓度计算 以标准溶液OD值与标准1 OD值的比值为纵坐标，所对应标准溶液浓度（ng/mL）的对数值为横坐标，制作标准曲线。根据样品OD值与标准1OD的比值，可从曲线上得到对应点的横坐标，即为FB1浓度的对数值，求得反对数即为测定液中FB1浓度C（ng/mL），按下列公式计算出样品中FB1含量： FB1含量（mg/kg）= C×K 式中： C：稀释后样品提取液中FB1含量（ng/mL） K：样品稀释倍数（按照本说明书中样品处理程序方法为50） |
