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小鼠糖化血红蛋白A1c（GHbA1c）ELISA试剂盒说明书 |
| 点击次数：746 发布时间：2012-06-08 |
本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断
小鼠（Mouse）糖化血红蛋白A1c（GHbA1c）ELISA检测试剂盒使用说明书
检测原理
试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。用纯化的抗体
包被微孔板，制成固相载体，往包被抗糖化血红蛋白A1c（GHbA1c）
抗体的微孔中依次加入标本或标准品、HRP标记的检测抗体，经过彻
底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，
并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的糖化血
红蛋白A1c（GHbA1c）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸
光度（OD 值），计算样品浓度。
样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞
刺激，收集血液后，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地
分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟
取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于
-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品
1. 酶标仪（450nm）
2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒温箱
操作注意事项
1. 试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20 分钟。从冰箱取出的
浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶*溶解
后再使用。2. 标准品临使用时再稀释，稀释后用剩的标准品应立刻丢弃，不可
保存。
3. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5. 所有液体组分使用前充分摇匀。
试剂盒组成
名称96孔配置48孔配置备注
微孔酶标板12 孔×8 条12 孔×4 条无
标准品（400ng/mL） 0.5mL 0.5mL 按说明书进行稀释
样本稀释液6mL 3mL 无
标准品稀释液6mL 3mL
检测抗体-HRP 6mL 3mL 无
20×洗涤缓冲液25mL 15mL 按说明书进行稀释
底物A 6mL 3mL 无
底物B 6mL 3mL 无
终止液6mL 3mL 无
封板膜2 张2 张无
说明书1 份1 份无
自封袋1 个1 个无
试剂的准备
1. 标准品：标准品（400ng/mL）在实验前用标准品稀释液进行倍比
稀释，得到6 个浓度点（包括标准品点）：400、200、100、50、25、
12.5 ng/mL
2. 20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20 稀释。
洗板方法
1. 手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min 后甩尽
孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板4-5 次。
2. 自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板4-5 次。
操作步骤
1. 从室温平衡20min 后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条密封放
回4℃。
2. 除空白孔外，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；待测样本
孔中先加入待测样本10μL，再加样本稀释液40μL（即样本稀释5
倍）；随后标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标
记的检测抗体50μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温
育50min。3. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去
洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5 次（也可用洗板机按说明
书操作洗板）。
4. 每孔加入底物A、B 各50μL，轻轻振荡混匀，37℃避光孵育15min。
5. 每孔加入终止液50μL，15min 内，在450nm 波长处测定各孔的
OD 值。
结果判断
1. 每个标准品和样本的OD 值应减去空白孔的OD 值。
2. 绘制标准曲线：在Excel 工作表中，以标准品浓度作横坐标，对
应OD 值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各
样本浓度值，再乘以稀释倍数，即为样本浓度。
试剂盒性能
1. 准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R 值，大于等于
0.9900。
2. 灵敏度：zui低检测浓度小于6 号标准品。
3. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
4. 重复性：板内、板间变异系数均小于15%。
5. 检测范围：0-400ng/mL
6. 贮藏：2-8℃，避光防潮保存。
7. 有效期：6 个月
免责声明
1. 试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验，否则所
产生的一切后果，由实验者承担，本公司概不负责。
2. 严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者
承担。 |
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