|
|
|
|
|
 |
|
|
猪圆环病毒（2 型）抗体检测试剂盒说明书 |
| 点击次数：777 发布时间：2012-06-13 |
猪圆环病毒（2 型）抗体检测试剂盒使用说明书
一、用途
猪圆环2 型病毒（Porcine circovirus type 2,PCV2）抗体检测试剂盒用于检测猪血清中的圆
环2 型病毒抗体，评估养猪场PCV 疫苗免疫状况及感染猪的血清学辅助诊断。
二、原理
本试剂盒采用间接ELISA 法，在酶标板条微孔上预包被纯化的圆环2 型病毒抗原。在试验中，
加入稀释后的待检血清，经过温育后，若样品中含有PCV 特异性抗体，则与包被板上的抗原结合，
经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后；再加入酶标二抗，与检测板上的抗原抗体复合物发生特异
性结合；再经洗涤除去未结合的酶结合物；在微孔中加入TMB 底物液，经酶催化形成蓝色产物，加
入终止液终止反应后，用酶标仪450nm 波长测定反应孔中的吸光度A 值。
三、试剂盒组成
1、PCV 抗原预包被板条 1 块 7、终止液 6ml
2、酶结合物 12ml 8、阴性对照 800μl
3、10 倍浓缩洗涤液 50ml 9、阳性对照 800μl
4、底物A 液 6ml 10、血清稀释板 1 块
5、底物B 液 6ml 11、封板膜 2 张
6、样本稀释液 50ml 12、说明书 1 份
四、使用单位需自备的设备及试剂
1、微量移液器： 0.5μl～10μl、10μl～100μl、100μl～1000μl。
2、一次性移液器吸头。
3、量筒：500ml。
4、96 孔板酶标仪。
5、蒸馏水或去离子水。
6、洗瓶或洗板机。
五、样品制备
取动物全血，按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血。
六、洗涤液的准备
浓缩洗涤液使用前应恢复至室温，如有盐结晶，摇动使结晶的盐溶解，然后用蒸馏水或去离子
水作10 倍稀释。稀释好的洗涤液可在4℃存放一周左右。
七、样品的稀释
在血清稀释板中按1：101 的体积比稀释待检血清（例如：200μl 样品稀释液中加2μl 待检血清）。
注意：阴性和阳性对照不用稀释。取每个样品后都要更换吸头，准确记录每个样品在板上的位
置。每个样品在加入到包被板微孔前应充分混匀。
第2 页共 2 页
八、注意事项
1、试剂盒使用前各试剂应平衡至室温，使用前应摇匀，使用后放回2～8℃。
2、不同品种、不同批号试剂盒的试剂组分不得混用，使用试剂时应防止试剂污染。
3、底物和终止液对皮肤和眼可能有刺激性，使用时应该注意防护。
4、TMB（底物B 液）不要暴露于强光和避免接触氧化剂。
5、检测板拆封后应避免受潮或沾水（未用完的抗原包被板加干燥剂放于自封袋中，并尽快置于2～
8℃）。
6、所有废弃物在丢弃之前应合理处理以免污染。
7、严格遵守操作说明可以获得的结果。操作过程中移液、定时和洗涤等的全部过程必须精
确。
8、血清稀释板为一次性用品，不得重复使用；血清稀释板的zui大容量为400μl/孔。
九、操作步骤
1、取预包被的检测板（根据样品多少，可拆开分次使用），将稀释好的待检血清取100μl
加入到检测板孔中。同时设阴性、阳性及空白对照各1 孔，取阴性及阳性对照各100μl
分别加入反应孔中，空白对照仅加入100μl 样本稀释液。轻轻振匀孔中样品（勿溢出），
盖上封板膜，置37℃温育30 分钟。
2、小心揭开封板膜，甩掉板孔中的溶液，用洗涤液洗3 次。每次用洗涤液注满板孔（约350μl），
静置1 分钟后甩掉。洗涤3 次后在干净吸水纸上拍干。
3、每孔加酶结合物100μl，盖上封板膜，置37℃温育30 分钟。
4、小心揭开封板膜，甩掉板孔中的溶液，洗涤3 次, 方法同2。切记zui后在干净吸水纸上拍干。
5、每孔先加底物A 液50μl、再加底物B 液50μl，混匀、盖上封板膜37℃闭光显色10 分钟。
6、每孔加终止液50μl，使反应终止，10 分钟内测定结果。
十、结果判定
以空白对照调零用酶标仪于450nm（630nm 作参比波长）读取吸光度A 值。试验成立的条件是阳
性对照孔A450 值大于或等于0.4，阴性对照孔A450 值必须小于0.1。如果试验无效，试验中的操
作值得怀疑，试验应重做，并仔细检察各组分。
样品 A450 值大于0.25+阴性对照孔均值，判为阳性；样品A450 值小于0.25+阴性对照孔均值，
判为阴性；如阴性对照孔均值小于0.05 按0.05 计算。
十一、贮存条件及有效期
2～8℃避光保存，有效期6 个月。 |
|
|
|
|
