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人活性氧（ROS）ELISA试剂盒操作步骤及注意要素 |
| 点击次数：2013 发布时间：2014-01-11 |
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ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。许多微生物在其生命活动过程中能产生某种特殊的代谢产物，具有选择性地抑制或杀死其他微生物的作用，某些抗生素只对少数细菌有抗菌作用，
人活性氧（ROS)ELISA试剂盒操作步骤：
1）取出试剂盒，室温（20-25℃）放置30分钟。
2）分组：取出96孔板，根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数，把剩余的板条继续冷藏处理。分别设标准品组（6个浓度）、空白孔、待测样品组。
3）标准品的稀释：准备小试管6 只，依次编好号码，先在各小试管中加入标准品稀释液100ul，然后取原浓度标准品100ul加入一只已编好号的试管中，充分混匀;再在该试管中取100ul 加入第二支试管中，充分混匀；再在该试管中取100ul加入第三只试管中，充分混匀；再在该试管中取100ul 加入第四只试管中，充分混匀；再在该试管中取100ul加入第五只试管中，充分混匀；然后在该试管中取100ul，弃掉。第六只试管作为0 号标准品。
注：为减少实验误差，保证准确性，建议设置复孔。
4）加样：依照标准品的顺序分别加入50ul的标准品溶液于空白微孔中；空白对照孔加入50ul的蒸馏水；其余微孔中先加样品40ul然后再加生物素标记的抗体10ul。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
5）温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。
6）洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒弃去，如此重复5 次，拍干。
7）加酶标溶液：标准品组、待测样本组各孔中加入50ul的酶标溶液（空白对照孔除外）。
8）温育：酶标板用封板纸密封后，放入湿盒内于37℃恒温孵育1小时。
9）洗板：用稀释后的洗涤液注满每孔，静置15-30s，充分清洗酶标板5次，用吸水纸*拍干。
10）显色：各孔加入显色剂A液50ul后，再加入显色剂B液50ul。
11）终止：25-37℃下避光反应10-15分钟，加入50ul终止液。
12）读板：在450nm波长读取各孔的OD值。
注意事项：
1）实验操作中必须使用一次性吸头，避免交叉污染。
2）加样：加样时，要控制加样速度，避免*孔与zui后一孔间的时间间隔过大，否则将会导致不同的预孵育时间，从而影响实验的准确性以及重复性。
3）孵育：严格按照说明书上规定的孵育时间和温度进行。
反应时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化，如果颜色较深，请提前加入终止液终止反应。
4）建议实验前预测样品含量，如样品浓度过高，应对样品进行稀释，计算结果时乘以相应的稀释倍数。
5）建议使用本试剂盒时先做预实验（即先做标准曲线，试用几个标本），如果对本试剂盒有任何疑问，可和所购经销商，如果因运输过程导致试剂盒失效，可要求调换，但概不承担产品本身以外的任何损失。 |
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